Микра №9.1


Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте его и откройте на своем компьютере.
1. Дайте определение понятиям "антиген" и "антитело".


Антигены

-

любые вещества, в том числе содержащиеся в микроорганизмах и клетках или
выделяемые ими, которые несут признаки генетически чужеродной информации и при
введении в организм вызывают развитие специфических иммунологических реакций.

Антитела
-

иммуноглобул
ины, которые вырабатываются клетками лимфоидных органов
после парентерального поступления антигена и способны специфически
взаимодействовать с ним.


2. Каковы основные свойства антигена?


Свойства антигена:

-

чужеродность,

-

высокая молекулярная масса,

-

к
оллоидная природа (растворимость в жидкостях макроорганизма),

-

способность подвергаться метаболизированию в организме,

-

способны при попадании в организм индуцировать образование антител
-

иммуногенность,

-

способны соединяться с этими АТ (специфичность)
.


3. Что такое вакцины?


Вакцины
-

препараты, предназначенные для созданния активного искусственно
приобретенного иммунитета с целью профилактики инфекционных заболеваний.


4. Как определяется концентрац
ия бактериальных тел во взвеси?


Используется
оптиче
ский метод.
Оптический (нефелометрический, турбидиметрический)
метод определения биомассы нашел широкое применение в лабораторных
микробиологических исследованиях, поскольку позволяет быстро и довольно точно
определить концентрацию клеток в суспензии или к
ультуральной жидкости.

В основе метода лежит измерение уменьшения количества света при его прохождении
через суспензию клеток. В определенных пределах оно обусловлено преимущественно
рассеянием света клетками и пропорционально их концентрации. Величина это
го
показателя зависит от многих факторов (формы и размеров клеток, оптических свойств
культуральной среды, длины волны падающего света и т. д.). Поэтому
нефелометрический метод пригоден лишь для тех микроорганизмов, рост которых
вызывает равномерное помутн
ение среды и не сопровождается заметным изменением
формы и размеров клеток, образованием мицелия, пленок или других скоплений.



5. Что такое оптический стандарт?



Стандарты мутности,
представляют собой взвесь частиц стекла пирекс в
дистиллированной воде. За единицу стандарта мутности общего назначения условно
принята мутность суспензии в физиологическом растворе бактерий


возбудителей тифа
с концентрацией клеток 100 млн/мл. Стандарт м
утности включает 4 эталона на 10, 11, 9 и
5 единиц, что соответствует содержанию 1
-
Ю ; 1,1
-
10 ; 0,9
-
10 и 0,5
-
10 клеток в 1 мл
взвеси. Для определения количества клеток пробирку с исследуемой суспензией ставят
рядом с эталоном 10 и рассматривают их в отраже
нном и проходящем свете на фоне
белого листа бумаги, в центре которого нанесено несколько черных линий. Эталоны 9 и
11 являются вспомогательными и позволяют более четко сравнить мутность исследуемой
суспензии с эталоном. Стандартизация мутности суспензии б
актерий (особенно часто в
случае тест
-
организмов) имеет существенное значение при приготовлении посевного
материала в серийных опытах, например, при определении антибиотической активности
препаратов методом диффузии в агар.



6. Какие методы введения антиг
енов в организм животного Вы знаете?


Способ введения антигена также играет роль как в смысле безопасности для жизни
животного, так и в смысле достижения цели получения высокоактивной сыворотки. Так,
для получения антитоксических сывороток (антидифтерийной
, аптистолбняч
-
ной) токсин
вводится подкожно; для изготовления же антидизентерийной сыворотки токсин
инъицируется под кожу, а культуры (убитые)

в вену. Интравенозный метод введения
антигена дает минимум осложнений при изготовлении сыворотки против рожи (кр
аснухи)
свиней, а кожный и подкожный методы введения антигена

при получении
антисибиреязвенной сыворотки.



7. Какие компоненты участвуют в реакции агглютинации?


Агглютинирующая сыворотка и антигены.


8.
Как ставится ориентировочная

реакция агглютинации на стекле?


На чистое предметное стекло пастеровской пипеткой наносят каплю
агглютинирующей противовибрионной сыворотки в разведении 1:25 и рядом (другой
пипеткой) каплю физиологического раствора (контроль антигена). В ту и другую кап
лю
пастеровской пипеткой добавляют по 1
-
2 капли взвеси вибриона. Осторожно
перемешивают петлей антиген вначале с физиологическим раствором, а затем с иммунной
сывороткой (но не наоборот!). Чтобы ускорить наступление реакции агглютинации,
предметное стекло,

на котором производится опыт, рекомендуется слегка покачивать и
очень осторожно подогревать высоко над пламенем спиртовки. Наблюдают за
агглютинацией невооруженным глазом или пользуясь лупой. Реакция агглютинации более
отчетливо видна, если смотреть на ка
плю снизу вверх. Феномен агглютинации
проявляется образованием взвешенных хлопьев и просветлением жидкости в капле с
сывороткой. В контроль ной капле (физиологический раствор) жидкость сохраняет свою
равномерную гомогенную мутность;



9.
Для чего нужен кон
троль при постановке реакции агглютинации?


Для сравнения реакции реакции агглютинации и феномена агглютинации с тем, где все
тихо
-
мирно.


10.
По каким признакам определяется степень агглютинации в пробирках?


В опытной пробирке жидкость станет прозрачной
(или почти прозрачной), а на дне
пробирки выпадает осадок, который при встряхивании пробирки разбивается на свободно
плавающие в жидкости хлопья. В контрольной пробирке жидкость сохранит равномерную
и гомогенную мутность.


(?)
11.
Как производится оценка с
тепени агглютинации?




(?)
12.
Для чего необходим контроль в реакции агглютинации?




(?)
13.
При какой степени агглютинации реакция считается еще положительной?




(?)
14.
Какая агглютинация происходит раньше: 0
-

или Н
-
?




15.
Какие компоненты участвуют

в реакции преципитации?


Для постановки реакции преципитации необходимо иметь:

а) преципитирующую сыворотку;

б) антиген в виде прозрачного раствора (экстракт из микробных

тел, из органов или из других патологических субстратов);

в) физиологический раствор
;

г) набор специальных преципитационных пробирок.


16.
Какова методика постановки реакции кольцепреципитации?


Для постановки реакции используют I %
-
ный агар, приготовленный на физиологическом
растворе. Тщательно профильтрованный полностью прозрачный
расплавленный агар
разливают в чашки Петри слоем 0,5 см толщиной. После застывания в пластинке агара с
помощью металлической трубочки вырезаются луночки диаметром 5
-
6 мм
-

одна в центре
чашки и 4
-
5 по окружности на расстоянии 2 см от центральной. В цент
ра
льную луночку
наливается сыворотка кролика, иммунизированного исследуемым антигеном, а в
периферические
-

раствор исследуемого антигена и сравниваемых с ним веществ. Чашки
помещаются в эксикатор с налитой на дно водой (для предупреждения высыхания) при
ком
натной температуре. Учет результатов реакции производится через 24, 48 и 72 часа.

Антитела из центральной луночки и антигены из периферических диффундируют,
навстречу друг другу, и в участках, где создаются эквивалентные концентрации антител и
антигенов, в
ыпадает дугообразная полоса преципитации. Появление нескольких полос
преципитации между центральной и периферическими луночками указывает на наличие
нескольких антигенных компонентов в исследуемой жидкости. Если полосы
преципитации, идущие от двух соседних

луночек, сливаются, это ука
зывает на
идентичность антигенов, содержащихся в этих луночках. Взаимное пересечение полос
преципитации свидетельствует о серологи
ческой неидентичности антигенов.


17.
Для каких целей используется реакция преципитации в агаре?


Реакция преципитации в агаре я
вляется одним из наиболее чувст
вительных методов
анализа растворимых антигенов. Она позволяет выявить число индивидуальных антигенов
в исследуемой жидкости (например, в бактериальных или тканевых экстрактах) и
произвести ана
лиз антигенного родства отдельных компонентов в смеси антигенов.


18.
Какова методика постановки реакции преципитации в агаре?


Для постановки реакции преципитации необходимо иметь:

а) преципитирующую сыворотку;

б) антиген в виде прозрачного раствора (экст
ракт из микробных

тел, из органов или из других патологических субстратов);

в) физиологический раствор;

г) набор специальных преципитационных пробирок.

Порядок работы

В преципитационную пробирку наливают 0,5 мл преципитирующей сыворотки, затем при
помощи п
астеровской пипетки наслаивают на сыворотку 0,5 мл раствора антигена.
Пробирку при этом следует держать в наклонном положении, а после добавления
антигена пробирку ставят в штатив (в вертикальном положении). При положительной
реакции на границе двух жидкос
тей появляется тонкое кольцо помутнения. Степень
реакции оценивается по выраженности кольца и времени его появления. Обычно кольцо
появляется в течение первых 3
-
10 минут.


19.
В чем заключается сущность реакции пассивной гемагглютинации?


В настоящее время

для диагностики многих заболеваний широко используется реакция
пассивной гемагглютинации (РПГА). Она основана на способности эритроцитов
адсорбировать на своей поверхности специфические микробные антигены или антитела к
ним. Сенсибилизированные таким обра
зом эритроциты агглютинируются в присутствии
гомологичных антител или антигенов.


20.
В чем заключается сущность реакции латекс
-
агглютинации?


Реакция латекс
-
агглютинации (ЛАГ) также является чувствительным и специфическим
методом диагностики. Основным
условием успешной постановки ЛАГ является строгое
соблюдение количественных соотношений компонентов системы при постановке реакции,
выполняемой микрометодом, в лунках на стекле: к 50 мкл исследуемого материала
добавляют 10 мкл латекс
-
препарата, частички ко
торого несут на себе специфические
антитела. После перемешивания смесь в течение 10 мин встряхивают. Результаты
учитывают по 4
-
х крестной системе. Положительной считают реакцию, оцененную не
менее чем двумя крестами. Всего на постановку реакции и ее учет т
ратится
-
около 30
-
40
мин.


21.
Какие преимущества имеет РПГА?


Вариантами использования РПГА являются реакция нейтрализации антигена (рНАг),
реакция нейтрализации антител (рНАт), реакция торможения пассивной гемагглютинации
(РТПГА). Для этих реакций использ
уются антигенные и антительные эритроцитарные
диагностикумы. Можно использовать одновременно две взаймоконтролирующие
однонаправленные реакции, например РПГА с антигенным диагностикумом и рНАг с
антительным эритроцитарным диагностикумом.



22.
Какие
компоненты участвуют в РПГА?


Для постановки реакции пассивной гемагглютинации необходимо иметь:

1. Сенсибилизированные эритроциты, или эритроцитарный диагностикум (т.е.
эритроциты, на которых адсорбированы антигены возбудителя) или эритроцитарный
антитель
ный диагностикум (т.е. эритроциты, на которых адсорбированы антитела к
микробным антигенам). Метод сенсибилизации эритроцитов зависит от вида возбудителя
или природы антител.

2. Исследуемую сыворотку (сыворотку больного или бактерионоси
теля, в которой
оп
ределяют наличие антител к возбудителю) или дру
гой материал от больного, в котором
предполагается наличие возбудителя или его антигенов.

3. Физиологический раствор.

4. Соответствующие контрольные системы (заведомо положительные и заведомо
отрицательные) д
ля большей, специфичности диагноза.

Для постановки РПГА используют либо круглодонные агглютинационные пробирки
одинакового диаметра либо специальные полистироло
вые пластинки с луночками.


(?)
23.
Что такое сенсибилизированные эритроциты?


Это эритроциты

чувствительные к определенному антигену.


24.
Как определяют результаты РПГА?


Учет реакции производят по четырехкрестной схеме:

++++ полная гемагглютинация, эритроциты равномерно устилают почти все дно
пробирки, нередко в виде зонтика;

+++ почти все
эритроциты агглютинированы и равномерно покры
вают дно пробирки;

++ наряду с равномерным агглютинатом на дне пробирки имеется осадок в виде
маленького колечка или "пуговки";

+ большинство эритроцитов осело в центре дна пробирки в виде диска и лишь
незначит
ельное количество агглютинировалось с образованием мелких хлопьев;


признаков агглютинации нет: эритроциты осели в виде маленького колечка или
"пуговки" (диска) в центре дна пробирки.



25.
Какова методика постановки реакции пассивной гемагглютинации?


Пос
тановка опыта

Во все пробирки (луночки) разливают физиологический раст
вор: в 1
-
ю пробирку
-
0,9 мл, а в остальные
-

по 0,5 мл. Затем в 1
-
ю пробирку вносят 0,1 мл испытуемой
сыворотки, перемешивают и пе
реносят 0,5 мл во 2
-
ю, вновь перемешивают и переносят
из
2
-
й пробирки в 3
-
ю 0,5 мл и так далее до 7
-
й пробирки включительно. Из 7
-
й пробирки 0,5
мл жидкости выливают, 8
-
я пробирка служит контро
лем и поэтому сыворотки не
содержит.

Эритроцитарный диагностикум перед использованием встряхивают до полного
исчезно
вения осадка на дне и получения гомогенной взвеси. По ходу работы встряхивание
часто повторяют. Эритроцитарный диагностикум разливают во все пробирки по 0,5 мл.
после этого пробирки встряхивают и помещают на

1,5
-
2 часа в термостат при 37 °С
, а
затем учитыв
ают результаты реакции (иногда через 16
-
20 часов).



26.
Что такое комплемент?


Комплемент

-

большая группа взаимодействующих между собой белков и гликопротеинов
крови, имеющихся у всех позвоночных (белки С1
-
С9, различные факторы и
инактиваторы, всего окол
о 20 компонентов).

Существует три пути активации системы комплемента:

а) Классический, инициируемый комплексом антиген
-
антитело;

б) Альтернативный, инициируемый бактериальными эндотоксинами, пропердином и
различными другими агентами, но протекающий без
учас
тия компонентов С1, С4 и С2;

в) Механизм С1
-
шунта, реализуется при дефиците С4
-
компонента, требует активации С1
-
компонента.


(?)
27.
Какую роль играет комплемент в реакциях иммунной сыворотки?




28.
Как получают гемолитическую сыворотку?


Гемолитиче
скую сыворотку получают иммунизацией кролика эритроцитами барана.


29.
Какова методика постановки реакции гемолиза?

На чистое стекло наносят на расстоянии 1,5 см друг от друга две капли гемолитической
сыворотки в разведении 1:300. На таком же расстоянии от

второй капли наносят другой
пипеткой каплю физиологического раствора. Во все три капли чистой пасте
ровской
пипеткой добавляют по I капле 4%
-
ной взвеси отмытых бара
ньих эритроцитов. После
этого в первую и третью капли добавляют по I капле комплемента (св
ежая сыворотка
морской свинки) в разведении 1:10, а во вторую каплю вместо комплемента добавляют
физиологичес
кий раствор в том же объеме. После этого содержимое всех капель
тщательно перемешивают (перед каждым перемешиванием петля должна быть прокалена
и

остужена). Для ускорения наступления реакции стек
ла могут быть слегка подогреты
высоко над пламенем спиртовки или в термостате 10 минут. Реакция гемолиза происходит
только в первой капле, в которой содержатся все необходимые для этого ингредиенты:
эритро
циты, антитела (сыворотка) и комплемент. Во второй капле про
изойдет реакция
агглютинации, так как в ней имеются антиген (эрит
роциты) и антитела (сыворотка), но
нет комплемента. В третьей капле (эритроциты + комплемент; никаких видимых
изменений не произ
ойдет.



30.
Что такое гемолитическая (индикаторная) система?




31.

Если конечным результатом РСК является гемолиз
-

реакция положительная или
отрицательная?




32.
Какие компоненты участвуют в РСК?

Для постановки основного опыта РСК необходимы следующие
ингредиенты:

а) антиген, рабочая доза которого уже оттитрована;

б) исследуемая сыворотка;

в) комплемент, рабочая доза которого должна быть также оттит
рована:

г) гемолитическая сыворотка с известным титром;

д) 3 %
-
ная взвесь отмытых эритроцитов барана;

е)
физиологический раствор.


33.
Для чего необходимо определени
е рабочих доз антигена и компле
мента?





34.
Как определяют рабочую дозу комплемента?




35.
Почему испытуемая сыворотка должна быть инактивирована?




36.
Как ставят основной опыт РСК?




37.
Е
сли в сыворотке больного отсутствуют антитела к антигену, ка
ким будет результат
РСК?




38.
Что называется титром гемолитической сыворотки?




39.
В каком разведении берется в
основной опыт гемолитическая сы
воротка?




40.
Какие контроли используются в
РСК?




41.
Какова классификация форм приобретенного иммунитета?




42.
Каковы различия между искусственным активно и искусственным пассивно
приобретенным иммунитетом?




43.
Какой иммунитет создается при введении гамма
-
глобулина?


Пассивный,
приобретенный.


44.
Какие условия хранения иммунопрепаратов?




45.
Как получают химические вакцины?




46.
Как готовят анатоксины?




47.
Как получают иммунные диагностические сыворотки?




48.
Какими свойствами обладают иммунные сыворотки?




49.
Как
получают лечебно
-
профилактические сыворотки?




50.
Как производят очистку лечебно
-
профилактических сывороток?




51.
Какие преимущества имеет гамма
-
глобулин перед сыворотками?




52.
В каких единицах дозируются антитоксические сыворотки?




53.
В каких
единицах дозируются анатоксины?


Одна антигенная единица анатоксина обозначается Limes flocculationis (Lf


порог
флоккуляции); это то количество анатоксина, которое целиком связывается с одной
антитоксической единицей антитоксина.

Антигенные свойства анат
оксинов обозначают и в единицах связывания. Для определения
ЕС необходимы испытуемый препарат анатоксина, стандартная антитоксическая
сыворотка (с содержанием 0,1 ME в 1 мл), опытная доза токсина (вытитрованная к 0,1 ME
стандартной сыворотки), белые мыши.



54.
Каковы методы введения аллергенов?


Внутрикожно, накожно.


55.
Каковы способы введения вакцин?


К основным методам вакцинации относятся: внутрикожный, подкожный,
внутримышечный, безыгольный, аэрозольный и пероральный.


56.
Как готовят аутовакцины, ка
ково их назначение?


Аутовакцины

лечебные

бактериальные

вакцин
,
приготовляемые

из

бактерий,

вызвавших

заболевание

и

в
зятых

от

того

же

больного,

для

лечения

которогоданная

вакцина

предназначена.




Приложенные файлы

  • pdf 26205686
    Размер файла: 216 kB Загрузок: 1

Добавить комментарий